-
поглощение
ультрафиолетового спектра или абсорбция света (спектрофотометрический метод); -
определенная
величина показателя преломления света (рефрактометрический метод); -
оптическая
активность белков или способность вращать плоскость поляризации (изменение
удельного вращения плоскости поляризации происходит при денатурации белка, измеряя эти изменения
можно следить за денатурацией белка). Денатурация белка - это одно из
наиболее существенных свойств белков. Денатурация является следствием
необратимых изменений. Денатурация – это изменение структуры белка по
сравнению с его нативным состоянием. При изменении структуры (развертывании
вторичной и третичной структуры) высвобождаются расположенные внутри сферических
конфигураций функциональные группы. Развертывание структур происходит
вследствие нарушения водородных и гидрофобных связей из-за относительно малой
энергии этих связей. Первичная структура при этом не изменяется, так как
пептидные связи сохраняются. Денатурация может явиться следствием физических
воздействий: высокая температура, давление, высокоэнергетическое излучение
(ультрафиолетовое или ионизирующее), звуковая энергия, либо химических
воздействий: органический растворитель (спирт, ацетон), раствор мочевины,
химические соединения, реагирующие с функциональными группами на поверхности
белка. При денатурации связи, ранее поддерживающие структуру,
высвобождаются и могут по новому ориентироваться. При этом активные
функциональные группы, которые первоначально размещались внутри сферических конфигураций, могут
взаимодействовать с другими молекулами белка. Сывороточные белки денатурируют полностью при
нагревании до 90оС (5 мин) или 76оС (60 мин). Фракции
сывороточных белков имеют различную термоустойчивость, так β-лактоглобулин
начинает денатурировать при 70оС, α-лактальбумин – 72, альбумин
сыворотки крови – 64, иммуноглобулины – 60оС. Степень денатурации зависит не только от
температуры, но и от продолжительности ее воздействия. |